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免疫组织化学染色中全自动染色机的运用实践
发布时间:2020-06-01

  摘    要: 目的 观察全自动染色机在免疫组织化学染色中的应用。方法 选取2018年12月该院所开出的免疫组化项目500项,随机分为观察组与对照组,各250项。观察组将免疫组化中的部分流程在全自动染色机上操作,对照组全手动染色。结果 观察组所用的人力工作时间和步骤完成时间分别为10分钟、225分钟,都明显低于手工操作对照组的80分钟、510分钟。部分流程在全自动染色机上操作的免疫组化结果稳定,定位准确,与手工染色相比,结果相似。结论 在病理科已有全自动染色机而没有免疫组化仪的条件下,可使用全自动染色机代替手工免疫组化染色中的大部分流程,从而提高免疫组化制片效率,节省人力。

  关键词: 全自动染色机; 免疫组织化学染色; 应用;

  全自动染色机主要用于常规HE染色,染色质量稳定、省时省力。目前全自动免疫组化仪由于制片成本高,好多中小型医院仍采用手工染色,其应用远远不如全自动染色机普遍,笔者采用全自动染色机代替手工免疫组化染色中的大部分流程,大大提高了免疫组化的染色效率,现将方法介绍如下:

  1 、材料与方法

  1.1、 资料与分组

  选取2 0 1 8年1 2月我院所开出的免疫组化项目500项,随机分为观察组与对照组,各250项。

  1.2 、方法

  观察组采用日本樱花全自动染色封片一体机(prisma-plus+film)替代部分手工染色,将已制备的组织石蜡切片,置入65℃烤箱烤2小时,取出将组织切片按顺序摆放,放入全自动染色机配套的切片架上,再次置入6 5℃烤箱,5分钟后,放入全自动染色机上处理(一次可放入6 0张切片),编辑程序为“免疫组化前处理”,切片依次放入以下试剂中:(1)二甲苯5分钟,(2)二甲苯5分钟,(3)二甲苯5分钟,(4)无水乙醇2分钟,(5)95%乙醇2分钟,(6)75%乙醇2分钟,(7)流水冲洗2分钟,(8)取出切片。注意此程序不要与封片机相连。待程序结束后取出切片,置入1.5%甲醇过氧化氢(3%过氧化氢︰甲醇为1︰1)室温阻断8分钟,取出切片自来水下冲洗干净,置入盛有已沸腾的p H6.0的柠檬酸抗原修复液中进行高压冒气修复2.5分钟,后室温冷却,自来水冲洗干净,置入蒸馏水1道清洗2分钟,磷酸缓冲盐溶液(PBS)3道各清洗2分钟,取出切片用免疫组织化学油笔将组织圈起来,圈距组织2mm左右,组织滴加正常非免疫山羊血清(即用型)室温孵育5分钟,将血清倾去,用纸巾将组织切片上多余的血清擦去,滴加对应的一抗试剂(即用型),4℃冰箱过夜;次日早,取出切片,室温放置10分钟复温,用自来水冲洗切片,置入蒸馏水1道清洗2分钟,PBS 3道各清洗2分钟,将切片置于湿盒中,滴加抗兔/鼠通用型二抗,室温孵育30分钟,取出切片置于切片架上,自来水冲洗干净后入蒸馏水1道清洗2分钟,PBS 3道各清洗2分钟,配制DAB显色液(底物缓冲液:显色液为50︰1)进行DAB显色,显色时间3~5分钟,通过显微镜观察显色进程,显色完成,自来水终止反应,将切片置入切片架上,自来水冲洗干净,将多余水分甩干,将切片架置入全自动染色机中,编辑程序为“免疫组化后处理”,切片依次放入以下试剂中:(1)苏木素5分钟,(2)流水冲洗2分钟,(3)0.1%盐酸酒精1/6分钟,(4)流水冲洗2分钟,(5)95%乙醇2分钟,(6)无水乙醇2分钟,(7)无水乙醇2分钟,(8)二甲苯2分钟,(9)二甲苯2分钟,(10)封片。此程序注意要与封片机相连。染色完成,查对无误,交于诊断医生。对照组采用手工染色,方法如下:一次可处理36张切片(是由本科室的切片架和染色缸的规格决定),染色流程同上,在全自动染色机的程序免疫组化前处理和免疫组化后处理程序全部换成手工操作即可。
 

免疫组织化学染色中全自动染色机的运用实践
 

  1.3 、观察指标

  记录并比较两组机器替代手工操作所用的流程人力工作时间和步骤完成所需时间,其余步骤两者相同,无须比较。

  2、 结果

  2.1、 两组免疫组化染色效率比较

  观察组所用的人力工作时间和步骤完成时间分别为10分钟、225分钟,明显低于对照组的80分钟、510分钟。

  2.2 、两组染色结果比较

  部分流程在全自动染色机上操作的免疫组化结果稳定,定位准确,与手工染色相比,结果相似,见图1-4。

  图1 免疫组化部分流程机器染色KI-67核表达
图1 免疫组化部分流程机器染色KI-67核表达

  图2 免疫组化部分流程机器染色P120膜表达
图2 免疫组化部分流程机器染色P120膜表达

  图3 免疫组化手工染色K I-67核表达
图3 免疫组化手工染色K I-67核表达

  图4 免疫组化手工染色P 12 0膜表达
图4 免疫组化手工染色P 12 0膜表达

  3 、讨论

  本科室利用全自动染色机处理免疫组织化学染色中与HE常规相同的步骤,使得免疫组织化学染色制片节约了大量的时间和人力,机器操作一次可处理60张切片,而手工只能处理36张切片,目前医院手工染色所用的切片架最多可放置36张,远远比不上机器的处理片数,再者机器操作过程中,工作人员无须过问,可以做其他工作且机器不容易出错,而手工染色,工作人员要一直操作且易发生人为错误,最重要的是染色机的应用也可以保障免疫组织化学染色结果的稳定可靠,目前全自动染色机已广泛应用于常规HE染色项目且染色质量稳定,省时省力[1];也有部分单位将全自动染色机应用于特殊染色项目上,也收到了较满意的效果[2],但需注意的是全自动染色机的试剂管理一定要严格,我科室采用切片数管理仪器,每500张切片更换染色机中所有试剂。全自动染色机在免疫组织化学染色中的应用探索,可为已配有全自动染色机的病理科室或研究机构提高手工免疫组织染色效率的有效方法。

  参考文献

  [1]张鹏,包磊,任丽芳,等.全自动染色机与手工染色的比较及其染色程序的改进[J].临床与实验病理学杂志,2015,31(2):224.
  [2]张雨婷,张子剑,袁悦莹,等.全自动染色机在PAS染色中的改良应用[J].诊断病理学杂志,2017,24(2):146.

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