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新城疫病毒疫苗的构建与免疫机制综述
发布时间:2020-01-28

  摘要:新城疫病毒引起的新城疫是一种禽类急性接触性传染病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。HN/F蛋白是2种有效的疫苗候选分子,乳酸乳球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、根癌农杆菌、鸡痘病毒、牛痘病毒、鸽痘病毒、禽红白血病病毒、禽副粘病毒3型、传染性法氏囊病病毒和传染性气管炎病毒等微生物经过改造后可成为理想的疫苗载体。本文综述了重组乳酸乳球菌(rLL-HN)、重组鼠伤寒沙门菌(rSt-F和rSt-HN)、重组单增李斯特菌(rLm-F)、重组根癌农杆菌(rAt-F)、重组鸡痘病毒(rFPV-HN、rFPV-F-gB和rFPV-F-HN-gB)、重组牛痘病毒(rVV-F)、重组鸽痘病毒(rPPV-F)、重组禽红白血病病毒(rAEV-HN)、重组禽副粘病毒3型(rAPMV-F)、重组传染性法氏囊病病毒(rIBDV-HN)和重组传染性气管炎病毒(rIBV-HN)等疫苗的构建及其免疫机制的研制现状。

  关键词:新城疫病毒; HN/F蛋白; 疫苗;

  作者简介: *李文桂(1967-),男,博士,研究员,从事病原微生物的分子生物学和分子免疫学研究,E-mail:cqliwengui@163.com;

  基金: 国家自然科学基金(30801052;30671083;30500423;30200239);

The status of research on microorganisms-based vaccine of Newcastle disease virus

  Abstract:Newcastle disease caused by Newcastle disease virus is one type of acute contagious infectious diseases in avians. Recently control of the disease by use of vaccines becomes a highlight of research. HN/F antigen is an effective candidate molecule of vaccine, and many microorganisms such as Lactococcus lactis, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, Agrobacteria tumefaciens, fowlpox virus, vaccinia virus, pigeonpox virus, avian erythroblastosis virus, avian paramyxovirus type 3, infectious bursal disease virus and infectious bronchitis virus may become ideal vectors after they are modified. This review outlines the status of the research on the constructions and immune mechanisms of rLL-HN, rSt-F, rSt-HN, rLm-F, rAt-F, rFPV-HN, rFPV-F-gB, rFPV-F-HN-gB, rVV-F, rPPV-F, rAEV-HN, rAPMV-F, rIBDV-HN and rIBV-HN.

  Keyword:Newcastle disease virus; HN/F protein; Vaccine;

  新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是禽副粘病毒1型(Avian paramyxovirus type 1,APMV-1)的重要成员之一,可在禽类引起新城疫,主要表现为以呼吸道和消化道黏膜出血为典型病变的急性接触性传染病,对禽类养殖危害较大。通常采用油苗或弱毒疫苗进行免疫预防,但人们发现油苗的免疫期短,成本高,使用不便,弱毒疫苗可引起体重减轻、次发细菌或病毒感染以及免疫抑制,弱毒疫苗还能引起鸡呼吸道的轻微病变,增加对其他病原的易感性,这就需要进一步研制新型疫苗。

  NDV的基因组编码6种蛋白:核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、L蛋白、基质蛋白(M)、血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)和融合蛋白(fusion protein,F)。其中HN、F和M位于病毒囊膜的表面,HN蛋白具有血凝素和神经氨酸酶的活性,能够识别宿主表面的受体,溶解受体,它还与F蛋白相互作用,促进NDV与细胞的融合。F蛋白介导病毒囊膜与宿主浆膜的融合,促进病毒的穿入和在细胞间的感染,它们可诱导宿主产生中和抗体,具有良好的免疫原性[1,2,3],上述结果提示血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白是2种有前途的蛋白抗原。

  虽然微生物常危害人类,但借助分子生物学技术的改造可成为理想的疫苗载体。它们可通过自然感染的途径将目的DNA片断转到免疫诱导的部位,尤其是特定的免疫细胞,通过细胞表达靶抗原,同时可诱导局部黏膜免疫和全身免疫应答。国内外学者先后报道了重组乳酸乳球菌(rLL-HN)、重组鼠伤寒沙门菌(rSt-F和rSt-HN)、重组单增李斯特菌(rLm-F)、重组根癌农杆菌(rAt-F)、重组鸡痘病毒(rFPV-HN、rFPV-F-gB和rFPV-F-HN-gB)、重组牛痘病毒(rVV-F)、重组鸽痘病毒(rPPV-F)、重组禽红白血病病毒(rAEV-HN)、重组禽副粘病毒3型(rAPMV-F)、重组传染性法氏囊病病毒(rIBDV-HN)和重组传染性气管炎病毒(rIBV-HN)等多种疫苗,本文将综述它们的构建及其免疫机制等方面的研究进展。

  1、细菌介导的重组新城疫病毒

  1.1 重组乳酸乳球菌

  乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L. lactis)是一种理想的疫苗载体,可成功表达轮状病毒的VP4蛋白[4].胡静涛等[5,6,7]以NDV基因组的总RNA为模板进行RT-PCR,扩增HN基因,插入pMD18-T得pMD18-HN,与pSIP09重组得pSIP-HN,将其电穿孔转化植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),200 μg/mL的红霉素筛选重组乳酸乳球菌,以从rLL-HN提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法可克隆出1 716 bp的HV基因片断,Western blot试验发现NDV感染血清可结合rLL-HN表达的66 kDa的HN抗原,流式细胞仪(FACS)检测发现rLL-HN的表面存在HN蛋白。将1×109 CFU重组疫苗灌胃免疫BALB/c鼠,每周连续3 d,间隔4 d,连续2周。此时皮下注射5×105结肠癌细胞株CT26-WT,5 d后可触及肿块。取1只鼠,分离肿瘤,切成2 mm3小块,腹部手术建立结肠癌的原位移植瘤模型,建模1周后用疫苗每周灌胃1次,连续3周,在免疫治疗后30 d发现小鼠肿瘤的体积明显缩小或退化,存活时间显着延长。

  1.2 重组鼠伤寒沙门菌

  鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium,S. typhimurium)的营养缺陷性突变株SL7207或SL1344均可作为疫苗载体使用。潘志明等[8,9,10,11]以NDV总RNA为模板扩增F基因,插入pGEM-T得pGEM-F,与pVAX1重组得pVAX1-F,电穿孔转化鼠伤寒沙门菌减毒株SL7207,筛选阳性重组菌,以从重组菌抽提的总RNA为模板进行RT-PCR可扩增出1.7 kb的F基因,免疫荧光发现重组菌的表面存在F蛋白抗原。起初采用109 CFU重组菌苗口服灌胃BALB/c鼠,在初次接种后2周进行加强,研究表明免疫组的血清IgG和小肠液SIgA在初次接种后2~4周上升,在初次接种后4周达到较高程度。接着将109或108 CFU疫苗口服免疫1 d龄的商品代伊莎褐蛋鸡,在首次免疫后2周和4周加强2次,在末次免疫后10 d肌肉注射104的50%胚胎致死剂量(50% embryo lethal doses,ELD50)新城疫病毒F48E9株进行攻击,在攻击后14 d发现109 CFU免疫组、108 CFU免疫组和对照组的存活率分别为72.3%(17/22)、52.1%(12/23)和12.5%(2/16)。

  田芳华等[12]以pMD18-HN为模板扩增HN基因,插入pYA3493得pYA3493-HN,将其电穿孔转化SL1344△crop△asd株,二氨基庚二酸(diaminopimelic acid,DAP)筛选重组鼠伤寒沙门菌,以从rSt-HN提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法可克隆出1.7 kb的HN基因片断。尚珂等[13]将pYA3493-HN质粒电穿孔转化鸡瘟沙门菌(Salmonella pullorum)的减毒株C17-13△crop△asd,DAP筛选重组鼠伤寒沙门菌,Western blot试验发现感染血清可识别rSt-HN表达的63 kDa的HN蛋白。李蒙等[14]以pMD18-HN为模板扩增HN基因,插入pcDNA3.0得pcD-HN,将其电穿孔转化鸡瘟沙门菌减毒株,筛选阳性重组菌,免疫荧光发现重组菌的表面存在HN蛋白分子。

  1.3 重组单增李斯特菌

  研究表明单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种疫苗载体,可成功表达人乳头瘤病毒16型的E7蛋白[15].徐晶靓等[16]以NDV F48E9株基因组DNA为模板扩增F基因,插入pUC18-hly,得pUC18-hly-F,与pKSV7重组得pKSV7-hly-F,将其电穿孔转化单增李斯特菌10403S株,筛选重组单增李斯特菌,以从rLm-F提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法可克隆出1 662 bp的F基因片断。Jiang等[17]以新城疫病毒F48E9株的基因组DNA为模板扩增截短的F基因(Fa),插入pUC18△PLcB得pUC18△PLcB-Fa,与pKSV7重组得pPAD-Fa,将其电穿孔转化单增李斯特菌10403S株,筛选阳性菌株,以从重组菌抽提的总RNA为模板进行RT-PCR扩增出1 kb的Fa基因,Western blot试验发现感染血清可识别重组菌表达的19.2 kDa的Fa抗原。接着将1×109 CFU疫苗口服或1×108 CFU疫苗腹腔注射免疫10 d龄的仔鸡,在首次免疫后1周进行加强,研究表明免疫组的血清IgG在首次免疫后3~6周上升,在首次免疫后6周升到较高程度,在首次免疫后7周用105 LD50的新城疫病毒F48E9株进行肌肉注射攻击,在攻击后2周计数存活率,发现口服组、腹腔注射组和对照组的存活率分别为56.5%(13/23)、30.4%(7/23)和0(0/19)。

  1.4 重组根癌农杆菌

  Fraley等[18]借助根癌农杆菌(Agrobacteria tumefaciens)将细菌基因导入植物细胞,这为研制转基因植物疫苗提供了可行性。杨振泉等[19]以pVAX1-F为模板扩增F基因,插入pGEM-T得pGEM-F,与pYU158重组得pYU158-F,将其采用冻融法导入EHA105株,然后感染水稻(Oryza sativa)的子叶,成功栽培转基因水稻,ELISA检测转基因植株,其中2/6株存在F蛋白,以从转基因水稻抽提的DNA为模板,采用PCR方法可克隆出1.7 kb的F基因片断,Western blot表明感染血清可结合转基因水稻表达的59 kDa的F蛋白。将400 μg的转基因叶片抗原蛋白添加弗氏佐剂,采用皮下注射的方法接种BALB/c鼠,在初次接种后10 d进行加强,在初次接种后25 d表明血清IgG上升,滴度可达1∶139.3.

新城疫病毒疫苗

配图 新城疫病毒疫苗

  2、病毒介导的NDV疫苗

  2.1 重组鸡痘病毒

  鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)的宿主范围仅限于禽类,基因组全长300 kb左右,大约含有250个开发阅读框(ORF),存在大量的复制非必需区,可作为病毒载体表达外源基因,可插入25~30 kb的外源DNA,基本不改变FPV的生物学特性,表达的目的蛋白可被糖基化或磷酸化修饰,可诱导抗体产生细胞和体液免疫应答,是一种理想的疫苗载体。Ogawa等[20]将HN基因插入pNZ136得pNZ1037,将其转化FPV,然后转染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF)株DF1,筛选重组鸡痘病毒,Western blot试验表明感染血清可结合rFPV-HN表达的66 kDa的HN抗原。用1.5×105 PFU重组FPV-HN翅内皮下注射7 d龄的莱杭仔鸡,在接种后2周提示血清IgG升高,滴度为1∶15.3,此时用3.4×105 CFU的NDV Sato株进行肌肉注射攻击,在攻击后2周计数存活率,发现免疫组的存活率为80%(8/10),而对照组为0(0/5)。

  Boursnell等[21]以新城疫病毒BC株的总RNA为模板扩增HN基因,插入pUC19得pUC19-HN,与pB3ME重组得pB3ME-HN,将其导入FPV后,随后感染DF1细胞株,筛选重组鸡痘病毒,Western blot试验表明感染血清可结合rFPV-HN表达的66 kDa的HN抗原。用106、104和102 PFU的rFPV-HN分别静脉注射3周龄的仔鸡,在免疫后3周肌肉注射105 ELD50新城疫病毒有毒株进行攻击,在攻击后16 d发现106 PFU免疫组、104 PFU免疫组、102 PFU免疫组和对照组的存活率分别为100%(10/10)、60%(6/10)、30%(3/10)和0(0/10)。

  Iritani等[22]将104 PFU重组病毒翅内皮下注射3 d龄的仔鸡,提示免疫组的血清IgG在初次接种后1~6周上升,在初次接种后4周上升到较高程度,滴度达到1∶1 068,在首次接种后62 d将105 ELD50新城疫病毒Sato株进行肌肉注射攻击,在攻击后14 d计数存活率,发现免疫组的存活率为100%(10/10),而对照组为0(0/5)。Edbauer等[23]将104的50%组织培养感染剂量(50% tissue-culture infectious doses,TCID50)重组病毒肌肉注射或点眼免疫仔鸡,在首次免疫后4周加强1次,在首次免疫后7周肌肉注射105 ELD50新城疫病毒Texas株进行攻击,在攻击后2周发现肌肉注射组、点眼组和对照组的存活率分别为100%(10/10)、30%(3/10)和0(0/10)。Nagy等[24]将104 PFU重组病毒翅内皮下注射4周龄的莱杭仔鸡,在免疫后3周发现血清IgG升高,此时肌肉注射105 ELD50新城疫病毒Texas株进行攻击,在攻击后2周发现免疫组和对照组的存活率分别为90%(9/10)和0(0/10)。Karaca等[25]将125、250、500和1 000 PFU重组病毒卵内注射14 d龄的孵化鸡蛋,在免疫接种后14 d仔鸡孵出,此时用104 ELD50新城疫病毒NDV-GB-TX株进行点眼滴鼻攻击,在攻击后14 d发现125 PFU免疫组、250 PFU免疫组、500 PFU免疫组和1 000 PFU免疫组和对照组的存活率分别为71%(10/14)、73%(8/11)、86%(6/7)、100%(11/11)和0(0/11)。

  曹殿军等[26]将pHN-PEFL-29导入FPV,然后感染DF1细胞,筛选重组鸡痘病毒,Western blot试验表明感染血清可结合rFPV-HN表达的74 kDa的糖基化HN蛋白和68 kDa非糖基化蛋白。将105 PFU、104 PFU疫苗肌肉注射仔鸡,提示免疫组的血清IgG在接种后6~16 d上升,在接种后14 d上升到较高程度,在接种后16 d肌肉注射3.4×105 PFU新城疫病毒F48E9株进行攻击,在攻击后14 d发现105 PFU免疫组、104 PFU免疫组和对照组的存活率分别为80%(8/10)、60%(6/10)、和0(0/10)。刘伟忠等[27]将HN基因插入pFG1175-11得pFG-HN,转化FPV的282E4株后再转染DF1细胞,筛选重组病毒,Northern杂交发现HN基因插入重组病毒的基因组中。吴艳涛等[28]将104 TCID50重组病毒肌肉注射1 d龄的仔鸡,在免疫后6周肌肉注射105 EID50新城疫病毒F48E8株进行攻击,在攻击后2周发现免疫组和对照组的存活率分别为96.7%(29/30)和0(0/5)。丁炜东等[29]将105 PFU重组病毒颈部皮下注射1 d龄的仔鸡,在免疫后3周肌肉注射106 ELD50的新城疫病毒F48E8株进行攻击,在攻击后10 d发现免疫组和对照组的存活率为100%(10/10)和0(0/10)。

  甘军纪等[30,31,32]将2×104 PFU重组病毒颈部皮下注射1 d龄的仔鸡,发现血清IgG在免疫后1~3周升高,在1周达较高水平,在免疫后3周用106 ELD50的新城疫病毒F48E8株进行点眼滴鼻攻击,发现免疫组和对照组的存活率分别为90%(18/20)和0(0/20)。接着用103 PFU的rFPV-HN接种14 d龄的仔鸡,在初次接种后4周进行加强,提示免疫组的血清IgG在初次接种后1~7周上升,在初次接种后6周上升到较高程度,在第2次接种后3、7、12或18周用106 ELD50新城疫病毒F48E8株进行攻击,发现各个免疫组的存活率均为100%(10/10),而对照组为0(0/10)。随后将103 PFU重组病毒免疫14 d的仔鸡,提示免疫组的血清IgG在接种后1~3周上升,在接种后2周上升到较高程度,在接种后3周用105 ELD50新城疫病毒F48E8株进行攻击,在攻击后14 d发现免疫组和对照组存活率分别为100%(10/10)和0(0/10)。

  传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)可引起传染性喉气管炎,糖蛋白B(glycoprotein B,gB)与病毒吸附和进入细胞有关,是一种保护性抗原[33].智海东等[34,35,36,37]以新城疫病毒的基因组DNA为模板扩增F基因,插入pSY538得pSY-F,与pSY781重组得pSY-F-gB,将其转化FPV后再转染DF1细胞,筛选重组鸡痘病毒,以从rFPV-F-gB提取的DNA为模板,采用PCR方法可克隆出549 bp的F基因片断和394 bp的gB基因片断,Western blot试验表明感染血清可结合rFPV-F-gB表达的110 kDa的融合蛋白。将5×103 PFU疫苗翅内皮下注射1 d龄的仔鸡,提示免疫组的血清特异性抗体在接种后10~25 d上升,在接种后20 d上升到较高程度,FACS发现外周血单核细胞(PBMC)的CD4+和CD8+亚群的数目无明显变化;在免疫后4周肌肉注射100 EID50新城疫病毒F48E8株或传染性喉气管炎病毒WG株进行攻击,发现NDV攻击组、ILTV攻击组和对照组的存活率分别为80%(8/10)、100%(10/10)和0(0/10)。

  孙惠玲等[38,39]以新城疫病毒F48E9株的总RNA为模板扩增HN基因,插入pSY538得pSY-HN,与pSY538LPF重组得pSY-HN-F,与pSY781重组得pSY-HN-F-gB,将其导入FPV017株,然后感染DF1细胞,筛选重组鸡痘病毒,Western blot试验表明感染血清可识别rFPV-F-HN-gB表达的63 kDa的HN、53 kDa的F以及58 kDa的gB蛋白。随后将103 PFU疫苗翅内皮下注射4周龄的莱杭鸡,发现血清HN、F和gB特异性IgG在免疫后1~4周升高,在免疫后3周达较高水平;在免疫后4周肌肉注射103 EID50新城疫病毒F48E9株或气管内接种500 EID50传染性喉气管炎病毒WG株进行攻击,在攻击后10 d计数存活率,发现NDV攻击组、ILTV攻击组和对照组的存活率分别为50%(5/10)、70%(7/10)和0(0/10)。

  2.2 重组牛痘病毒

  Sutter等[40]报道牛痘病毒(Vaccinia virus,VV)的MVA减毒株可表达多种病原体的目的等。Meulemans等[41]将15的50%鸡感染剂量(50% chicken infective doses,CID50)重组VV-F翅内皮下注射15周龄的仔鸡,在免疫后12 d发现血清IgG升高,此时肌肉注射106.5的50%鸡致死剂量(50% chicken lethal doses,CLD50)新城疫病毒Italien株进行攻击,在攻击后14 d发现免疫组和对照组的存活率分别为100%(9/9)和14.3%(1/7)。

  2.3 重组鸽痘病毒

  鸽痘病毒(Pigeonpox virus,PPV)是一种禽痘病毒,可作为表达外源抗原的疫苗载体。Letellier等[42]将F基因插入pTK1得pTK-F,将其转化PPV△TK株后再转染DF1细胞,用25 μg/mL的5-溴-2′-脱氧尿苷(BUdR)筛选重组病毒。将104.33 TCID50疫苗滤泡或点眼滴鼻接种6周龄的仔鸡,在免疫后20 d发现血清IgG升高,滴度分别为1∶4 011和1∶483,此时用106 ELD50新城疫病毒Italian株点眼滴鼻进行攻击,在攻击后4周发现滤泡接种组、点眼滴鼻接种组和对照组的存活率分别为94.4%(17/18)、50%(11/22)和0(0/10)。

  2.4 重组禽红白血病病毒

  禽红白血病病毒(Avian erythroblastosis virus,AEV)是一种逆转录病毒,可借助pNHn3载体表达目的基因。Cosset等[43]将HN基因插入pNHn3得pNHn3-HN,将其转化AEV后再转染DF1细胞,筛选重组病毒,免疫荧光发现重组病毒的表面存在HN蛋白分子。将107 PFU重组病毒加弗氏佐剂肌肉注射1周龄的仔鸡,在首次免疫后2周加强1次,在首次免疫后5周肌肉注射105.3 EID50新城疫病毒Texas株进行攻击,在攻击后2周发现免疫组和对照组的存活率分别为100%(10/10)和0(0/10)。

  2.5 重组禽副粘病毒3型

  禽副粘病毒3型(Avian paramyxovirus type 3,APMV-3)是一种RNA病毒,仅在胞浆复制,不整合入宿主细胞的基因组中,仅编码8种蛋白,对免疫应答的影响较小,仅感染禽类,对人体无害,可通过点眼滴鼻接种,感染仅局限于呼吸道,可在鸡胚或细胞株中产生高滴度的病毒[44].Kumar等[45]将F基因插入pAPMV3f1得pAPMV-F,将其导入AMPV3,然后感染DF1细胞,筛选重组禽副粘病毒3型,Western blot试验表明感染血清可结合rAPMV-F表达的55 kDa的F蛋白。将106 EID50疫苗点眼滴鼻免疫2周龄的仔鸡,在免疫后3周发现血清IgG升高,此时点眼滴鼻、肌肉注射或静脉注射100 CLD50新城疫病毒Texas株进行攻击,在攻击后10 d发现3个攻击组的存活率均为100%(10/10),而对照组为0(0/10)。

  2.6 重组传染性法氏囊病病毒

  传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是一种RNA病毒,仅在宿主细胞的胞浆复制,基因组较小,仅产生少量蛋白,对热稳定,容易生产,可通过饮水或喷洒免疫。据报道IBDV可表达口蹄疫病毒的VP2蛋白和丙型肝炎病毒的细胞表位等[46,47].Li等[48]将HN基因插入pIBDV得pIBDV-HN,将其转化传染性法氏囊病病毒Gt株,然后感染DF1细胞,筛选重组病毒,Western blot试验表明感染血清可结合rIBDV-HN表达的74 kDa的HN蛋白。将105 TCID50疫苗点眼滴鼻免疫14 d龄的莱杭鸡,提示免疫组的血清IgG在接种后2~3周上升,在接种后3周上升到达较高程度,在接种后3周用103 ELD50传染性法氏囊病病毒GX株点眼滴鼻进行攻击,在攻击后10 d发现免疫组和对照组的存活率分别为90%(9/10)和0(0/10)。

  2.7 重组传染性气管炎病毒

  传染性气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)是一种RNA病毒,基因组大小为27.6 kb,含有许多非必需区,可插入外源基因,而不影响病毒的复制和生物学特征,可作为疫苗载体[49].Yang等[50]将HN基因插入pMD19得pMD-HN,与pIBV重组得pIBV-HN,将其转化传染性气管炎病毒H120株后再转染BHK-21细胞,筛选重组传染性气管炎病毒,以从rIBV-HN抽提的总RNA为模板,采用RT-PCR方法可克隆出1 838 bp的HN基因片断。将105 EID50疫苗点眼滴鼻免疫107 d龄的仔鸡,在免疫后2周发现血清IgG升高。此时用10 EID50的传染性气管炎病毒41株点眼滴鼻进行攻击,在攻击后2周发现免疫组和对照组的存活率分别为90%(9/10)和50%(5/10)。

  3、结 语

  虽然国内外学者报道的微生物介导的新城疫病毒疫苗免疫一些动物可产生一定的保护力,但它们诱导的保护性免疫应答的水平较低,尚未达到人们所要求的程度。人们发现重组乳酸乳球菌苗易于培养,转化效率高,重复性好,但长期低剂量口服该疫苗有可能诱导免疫耐受;鼠伤寒沙门菌苗的表达产物与天然蛋白存在差异,表达水平较低;重组单增李斯特菌自身含有的抗生素抗性基因可能对人体有害,表达蛋白的水平较低,表达产物与天然蛋白存在较大差异;转基因植物疫苗的质量控制和认证较难,普遍不被公众认可和接受。通常病毒载体的自身蛋白及其双链RNA可作为免疫佐剂,但病毒载体存在潜在的致癌和致病性。宿主体内普遍存在抗病毒的抗体,早先存在的抗病毒抗体可抑制后续接种的免疫应答。病毒载体的靶向性差,常引起感染的靶器官或非靶器官产生病变,影响免疫效果。

  现代生物学技术的发展日新月异,势必推动新城疫病毒的基因组学、蛋白质组学、代谢组学、转录组学以及表观遗传学的研究进展。这些学科的进展对于阐明新城疫病毒HN/F等蛋白的抗原结构与功能的关系、筛选新的抗原分子以及构建由各期抗原分子组成的多期多价疫苗均具有重要的指导意义;需要深入研究这些疫苗的免疫原性、转化效率、MHC限制性以及能否长期在宿主体内表达等诸多问题;尚需研制新型佐剂、疫苗载体和制备融合抗原,从而提高疫苗的免疫原性;尚需探讨在宿主体内正确评价新型疫苗分子的保护力及其免疫机制的方法;积极开展新城疫病毒抗原蛋白家族及其他相关蛋白生物学功能研究,从而提高疫苗的设计水平。期待这些焦点问题的阐明推动载体介导的新城疫病毒疫苗的研究进入一个新高度。

  参考文献

  [1] Kim SH,Subbiah M,Samuel AS,et al.Roles of the fusion and hemagglutinin-neuraminidase proteins in replication,tropism,and pathogenicity of avian paramyxoviruses[J].J Virol,2011,85(17):8582-8596.
  [2] Sakaguchi M,Nakamura H,Sonoda K,et al.Protection of chickens from Newcastle disease by vaccination with a linear plasmid DNA expressing the F protein of Newcastle disease virus[J].Vaccine,1996,14(8):747-752.
  [3] Nagy E,Krell PJ,Dulac GC,et al.Vaccination against Newcastle disease with a recombinant baculovirus hemagglutinin-neuraminidase subunit vaccine[J].Avian Dis,1991,35(3):585-590.
  [4] Li YJ,Ma GP,Li GW,et al.Oral Vaccination with the porcine rotavirus VP4 outer capsid protein expressed by Lactococcus lactis induces specific antibody production[J].J Biomed Biotech,2010:708460.
  [5] 胡静涛,杨文涛,肖冲,等。GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建及原核表达[J].中国兽医科学,2012,42(9):938-942.HU Jingtao,YANG Wentao,XIAO Chong,et al.Construction and prokaryotic expression of recombinant Lactobacillus expression vector labeling with GFP gene of HN gene of Newcastle disease virus[J].Chin Vet Sci,2012,42(9):938-942.(in Chinese)
  [6] 胡静涛,郭衍冰,杨文涛,等。重组鹅源新城疫病毒HN基因乳酸菌的构建[J].中国兽医科学,2015,45(12):1242-1246.HU Jingtao,GUO Yanbing,YANG Wentao,et al.Construction of recombinant Lactobacillus containing HN gene of Newcastle disease virus from goose[J].Chin Vet Sci,2015,45(12):1242-1246.(in Chinese)
  [7] 胡静涛,李俊峰,孙永峰,等。重组新城疫病毒HN基因乳酸菌抑制结肠癌作用评价[J].中国兽医学报,2015,35(12):1921-1927.HU Jingtao,LI Junfeng,SUN Yongfeng,et al.Effect of anti-tumor induced by NDV HN gene recombinant Lactobacillus plantarum on colon cancer bearing BALB/c mice[J].Chin Vet Sci,2015,35(12):1921-1927.(in Chinese)
  [8] 潘志明,焦新安,张小荣,等。运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性[J].农业生物技术学报,2004,12(4):412-415.PAN Zhiming,JIAO Xin′an,ZHANG Xiaorong,et al.DNA vaccine against Newcastle disease virus of goose origin delivered by attenuated Salmonella typhimurium and its immunogenicity for mice[J].J Agr Biotechn,2004,12(4):412-415.(in Chinese)
  [9] 潘志明,焦新安,黄金林,等。携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力[J].微生物学报,2005,45(6):937-941.PAN Zhiming,JIAO Xin′an,HUANG Jinlin,et al.Safety and efficacy of attenuated Salmonella typhimurium harbouring DNA vaccine against Newcastle disease virus[J].Acta Microbiol Sin,2005,45(6):937-941.(in Chinese)
  [10] 潘志明,焦新安,唐丽华,等。携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性[J].中国兽医学报,2007,27(1):17-21.PAN Zhiming,JIAO Xin′an,TANG Lihua,et al.Construction and its immunogenicity of attenuated Salmonella typhimurium harbouring DNA vaccine against Newcastle disease virus[J].Chin J Vet Sci,2007,27(1):17-21.(in Chinese)
  [11] 潘志明,黄金林,程宁宁,等。稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性[J].病毒学报,2008,24(1):41-46.PAN Zhiming,HUANG Jinlin,CHENG Ningning,et al.Construction and its immunogenicity of attenuated Salmonella typhimurium harbouring DNA vaccine against Newcastle disease virus[J].Chin J Virol,2008,24(1):41-46.(in Chinese)
  [12] 田芳华,程相朝,张春杰,等。以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定[J].中国畜牧兽医,2013,40(11):59-63.TIAN Fanghua,CHENG Xiangchao,ZHANG Chunjie,et al.Construction and identification of recombinant attenuated Salmonella typhimurium oral NDV-HN vaccine[J].Chin Ani Husb Vet Med,2013,40(11):59-63.(in Chinese)
  [13] 尚珂,程相朝,郁川,等。表达NDV HN蛋白重组减毒鸡白痢沙门菌△crp△asdC79-13的构建及生物学特性[J].中国兽医学报,2016,36(4):589-594.SHANG Ke,CHENG Xiangchao,YU Chuan,et al.Construction and biological characteristics of recombinant attenuated Salmonella pullorum△crp△asdC79-13 expressing HN gene antigen of Newcastle disease virus[J].Chin J Vet Sci,2016,36(4):589-594.(in Chinese)
  [14] 李蒙,余祖华,郁川,等。表达NDV HN蛋白的减毒雏沙门菌ΔcrpC79-13(pcDNA3.0-HN)的构建及生物学特性研究[J].中国兽医科学,2016(3):290-295.LI Meng,YU Zuhua,YU Chuan,et al.Construction and biological characteristics of recombinant attenuated Salmonella pullorum△crp△asdC79-13(PcDNA3.0-HN) expressing HN gene antigen of Newcastle disease virus[J].Chin Vet Sci,2016(3):290-295.(in Chinese)
  [15] Gunn GR,Zubair A,Peters C,et al.Two Listeria monocytogenes vaccine vectors that express different molecular forms of human papillomavirus-16(HPV-16)E7 induce qualitatively different T cell immunity that correlates with their ability to induce regression of established tumors immortalized by HPV-16[J].J Immunol,2001,167(24):6471-6479.
  [16] 徐晶靓,江玲丽,陈宁,等。携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定[J].微生物学报,2006,46(3):116-121.XU Jingjing,JIANG Lingli,CHEN Ning,et al.Characterization of a recombinant Listeria monocytogenes strain containing fusion protein gene of Newcastle disease virus[J].Acta Microbiol Sin,2006,46(3):116-121.(in Chinese)
  [17] Jiang LL,Ke CL,Xu JJ,et al.Listeria monocytogenes mutants carrying Newcastle disease virus F gene fused to its actA and p1cB:in vitro expression and immunogenicity in chickens[J].Acta Biochem Biophys Sin,2007,39(1):57-66.
  [18] Fraley RT,Rogers SG,Horsch RB,et al.Expression of bacterial genes in plant cells[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1983,80(15):4803-4807.
  [19] 杨振泉,刘巧泉,于恒秀,等。新城疫病毒融合蛋白在转基因水稻叶片中的表达及其免疫原性[J].遗传学报,2005,32(12):1305-1311.YANG Zhenquan,LIU Qiaoquan,YU Hengxiu,et al.Expression and immunization testing of fusion protein of Newcastle disease virus in leaf tissue of transgenic rice[J].Acta Genet Sin,2005,32(12):1305-1311.(in Chinese)
  [20] Ogawa R,Yanagida N,Saeki S,et al.Recombinant Fowlpox viruses inducing protective immunity against Newcastle disease and fowlpox viruses[J].Vaccine,1990,8(5):486-490.
  [21] Boursnell MEG,Green PF,Samson ACR,et al.A recombinant fowlpox virus expressing the hemagglutinin-neuraminidase gene of Newcastle disease virus(NDV) protects chickens against challenge by NDV[J].Virol,1990,178(1):297-300.
  [22] Iritani Y,Aoyama S,Takigami S,et al.Antibody response to Newcastle disease virus(NDV) of recombinant fowlpox virus(FPV) expressing a hemagglutinin-neuraminidase of NDV into chickens in the presence of antibody to NDV or FPV[J].Avian Dis,1991,35(4):659-661.
  [23] Edbauer C,Weinberg R,Taylor J,et al.Protection of chickens with a recombinant fowlpox virus expressing the Newcastle disease virus hemagglutinin-neuraminidase gene[J].Virology,1990,179(2):901-904.
  [24] Nagy E,Krell PJ,Heckert RA,et al.Vaccination of chickens with a recombinant fowlpox virus containing the hemagglutinin-neuraminidase gene of Newcastle disease virus under the control of the fowlpox virus thymidine kinase promoter[J].Can Vet Res,1993,57(4):306~308.
  [25] Karaca K,Sharma JM,Winslow BJ,et al.Recombinant fowlpox viruses coexpressing chicken type I IFN and Newcastle disease virus HN and F genes:influence of IFN on protective efficacy and humoral responses of chickens following in ovo or post-hatch administration of recombinant viruses[J].Vaccine,1998,16(16):1496-1503.
  [26] 曹殿军,刘惠莉,王莉林,等。鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究[J].中国免疫学杂志,1998(1):61-64.CAO Dianjun,LIU Huili,Wang Lilin,et al.Recombinant fowlpox virus expressing the Newcastle disease virus hemagglutinin-neuraminidase and its protective efficacy[J].Chin J Immunol,1998(1):61-64.(in Chinese)
  [27] 刘伟忠,吴艳涛,姜焱,等。表达新城疫病毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建和鉴定[J].微生物学报,1998(5):359-364.LIU Weizhong,WU Yantao,JIANG yan,et al.Construction and identification of recombinant fowlpox virus for expressing the hemagglutinin-neuraminidase glycoprotein of Newcastle disease virus strain F48E8[J].Acta Microbiol Sin,1998(5):359-364.(in Chinese)
  [28] 吴艳涛,彭大新,刘秀梵,等。表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J].生物工程学报,2000,16(5):591-594.WU Yantao,PENG Daxin,LIU Xiufan,et al.A recombinant fowlpox virus expressing the fusion protein of Newcastle disease virus strain F48E8 and its protective efficacy[J].Chin J Biotechn,2000,16(5):591-594.(in Chinese)
  [29] 丁炜东,曹丽萍,张体银,等。表达新城疫病毒F、HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验[J].中国兽医杂志,2005,41(2):10-14.DING Weidong,CAO Liping,ZHANG Tiyin,et al.Genetics and immune efficacy of recombinant fowlpox virus expressing Newcastle disease virus F gene and HN gene[J].Chin J Vet Med,2005,41(2):10-14.(in Chinese)
  [30] 甘军纪,田志鹏,陶鸽,等。单表达和共表达NDVF和HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的免疫效力比较试验[J].中国预防兽医学报,2010,32(10):790-794.GAN Junji,TIAN Zhipeng,TAO Ge,et al.Protective efficacy of recombinant fowlpox virus expressing Newcastle disease virus F gene and HN gene or co-expressing F and HN genes[J].Chin J Prev Vet Med,2010,32(10):790-794.(in Chinese)
  [31] 甘军纪,陶鸽,张胜文,等。鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究[J].中国兽医学报,2011,31(12):1681-1685.GAN Junji,TAO Ge,ZHANG Shengwen,et al.Duration of immunity and boost vaccination of a recombinant fowlpox virus expressing Newcastle disease virus HN gene[J].Chin J Vet Sci,2011,31(12):1681-1685.(in Chinese)
  [32] 甘军纪,刘武杰,彭大新,等。表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒的部分生物学特性研究[J].畜牧与兽医,2011,43(6):1-4.GAN Junji,LIU Wujie,PENG Daxin,et al.Biological characterization of a recombinant fowlpox virus expressing Newcastle disease virus HN gene [J].Ani Husb Vet Med,2011,43(6):1-4.(in Chinese)
  [33] York JJ,Fahey KJ.Vaccination with affinity-purified glycoproteins protects chickens against infectious laryngotracheitis herpesvirus[J].Avian Pathol,1991,20(4):693-704.
  [34] 智海东,王云峰,童光志,等。传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因在重组禽痘病毒中共表达[J].生物工程学报,2004,20(6):963-966.ZHI Haifeng,WANG Yunfeng,TONG Guangzhi,et al.Co-expression of glycoprotein (gB) of infectious laryngotracheitis virus and fusion gene of Newcastle disease virus in a recombinant fowlpox virus[J].Chin J Biotechn,2004,20(6):963-966.(in Chinese)
  [35] 智海东,王云峰,王玫,等。新城疫病毒F基因与传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒免疫保护产生时间的测定[J].中国兽医科学,2005,35(1):41-44.ZHI Haidong,WANG Yunfeng,WANG Mei,et al.Onset of protection in SPF chickens challenged with recombinant fowlpox virus expressing gB gene of infectious laryngotracheitis and fusion gene of Newcastle disease virus[J].Chin Vet Sci,2005,35(1):41-44.(in Chinese)
  [36] 智海东,王云峰,孙永科,等。表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态[J].中国预防兽医学报,2006,28(5):535-538.ZHI Haidong,WANG Yunfeng,SUN Yongke,et al.Kenetics of lymphophocyte subsets in peripheral blood of chickens inoculated with recombinant fowlpox virus expressing gB gene of infectious laryngotracheitis virus and fusion gene of Newcastle disease virus and after challenge[J].Chin J Prev Vet Med,2006,28(5):535-538.(in Chinese)
  [37] 智海东,王云峰,孙永科,等。表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验[J].中国预防兽医学报,2006,28(1):13-15.ZHI Haidong,WANG Yunfeng,SUN Yongke,et al.Duration of recombinant fowlpox virus vaccine against infectious laryngotracheitis and Newcastle disease[J].Chin J Prev Vet Med,2006,28(1):13-15.(in Chinese)
  [38] 孙惠玲,王云峰,苗得园,等。表达鸡新城疫病毒F、HN基因和传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其特性研究[J].生物工程学报,2006,22(6):931-939.SUN Huiling,WANG Yunfeng,MIAO Deyuan,et al.Construction and characterization of a recombinant fowlpox virus co-expressing F,HN genes of Newcastle disease virus and gB gene of infectious laryngotracheitis virus[J].Chin J Biotechnol,2006,22(6):931-939.(in Chinese)
  [39] Sun HL,Wang YF,Tong GZ,et al.Protection of chickens from Newcastle disease and infectious laryngotracheitis with a recombinant fowlpox virus co-expressing the F,HN genes of Newcastle disease virus and gB gene of infectious laryngotracheitis virus[J].Avian Dis,2008,52(1):111-117.
  [40] Sutter G,Staib C.Vaccinia vectors as candidate vaccines:the development of modified vaccinia virus ankara for antigen delivery[J].Curr Drug Targets-Infect Disorders,2003,3(1):263-271.
  [41] Meulemans G,Letellier C,Gonze M,et al.Newcastle disease virus F glycoprotein expressed from a recombinant vaccinia virus vector protects chickens against live-virus challenge[J].Avian Pathol,1988,17(4):821-827.
  [42] Letellier C,Burny A,Meulemans G.Construction of a pigeonpox virus recombinant:expression of the Newcastle disease virus(NDV) fusion glycoprotein and protection of chickens against NDV challenge[J].Arch Virol,1991,118(1-2):43-56.
  [43] Cosset FL,Bouquet JF,Drynda A,et al.Newcastle disease virus(NDV) vaccine based on immunization with avian cells expressing the NDV hemagglutinin-neuraminidase glycoprotein[J].Virol,1991,185(2):862-866.
  [44] Kumar S,Nayak B,Collins PL,et al.Complete genome sequence of avian paramyxovirus type 3 reveals an unusually long trailer region[J].Virus Res,2008,137(2):189-197.
  [45] Kumar S,Nayak B,Collins PL,et al.Evaluation of the Newcastle disease virus F and HN proteins in protective immunity by using a recombinant avian paramyxovirus type 3 vector in chickens[J].J Virol,2011,85(13):6521-34.
  [46] Rémond M,Da Costa B,Riffault S,et al.Infectious bursal disease subviral particles displaying the foot-and-mouth disease virus major antigenic site[J].Vaccine,2009,27(1):93-98.
  [47] Upadhyay C,Ammayappan A,Patel D,et al.Recombinant infectious bursal disease virus carrying hepatitis C virus epitopes[J].J Virol,2011,85(3):1408-1414.
  [48] Li K,Gao L,Gao HL,et al.Recombinant infectious bursal disease virus expressing Newcastle disease virus(NDV) neutralizing epitope confers partial protection against virulent NDV challenge in chickens[J].Antiviral Res,2014,101(1):1-11.
  [49] Bentley K,Armesto M,Britton P.Infectious bronchitis virus as a vector for the expression of heterologous genes[J].PLoS One,2013,8(6):e67875.
  [50] Yang X,Zhou YS,Li JA,et al.Recombinant infectious bronchitis virus(IBV) H120 vaccine strain expressing the hemagglutinin-neuraminidase(HN) protein of Newcastle disease virus(NDV) protects chickens against IBV and NDV challenge[J].Arch Virol,2016,161(5):1209-1216.

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